නිෂ්පාදන

ප්‍රෝටීන් පොස්පරීකරණ ජාලවල අතිවිශාල සංකීර්ණත්වය නිසා ප්‍රෝටියෝම්-පුළුල් පොස්පරීකරණ සිදුවීම් විශ්ලේෂණය තවමත් ප්‍රධාන විශ්ලේෂණාත්මක අභියෝගයකි.මෙම කාර්යයේදී, ෆොස්ෆොප්‍රොටියෝමයේ ගෝලීය විශ්ලේෂණයට දායක වීමට ඇති හැකියාව සම්බන්ධයෙන් Lys-N, Lys-C සහ trypsin වල අනුපූරකතාව අපි ඇගයීමට ලක් කරමු.අඩු pH අගය ශක්තිමත් කැටායන හුවමාරුවේ පිරිපහදු කළ අනුවාදයක් N-terminally acetylated, phosphorylated සහ non modified peptides කාර්යක්ෂමව වෙන් කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී.එන්සයිම තුනේ එකතුවක් භාවිතා කරමින් ප්‍රෝටීන් මිලිග්‍රෑම් 1 කින් <1% ක සාවද්‍ය සොයාගැනීම් අනුපාතයක් සමඟ අනවශ්‍ය ෆොස්පෙප්ටයිඩ 5036 ක් හඳුනා ගත හැකිය.විවිධ ප්‍රෝටීස් සමඟ ජනනය කරන ලද ෆොස්පොපෙප්ටයිඩ දත්ත කට්ටල අතර අතිච්ඡාදනය ආන්තික බව අපගේ දත්ත හෙළි කළ අතර, සමානව ජනනය කරන ලද ට්‍රයිප්ටික් දත්ත කට්ටල දෙකක් අතර අතිච්ඡාදනය අවම වශයෙන් 4 ගුණයකින් වැඩි බව සොයා ගන්නා ලදී.මේ ආකාරයට, ලයිස්-එන් සහ ට්‍රිප්සින් සමාන්තරව භාවිතා කිරීම ට්‍රයිප්සින් හා සසඳන විට අනාවරණය වූ ෆොස්පෙප්ටයිඩ සංඛ්‍යාව 72% කින් වැඩි කිරීමට හැකි වූ අතර ට්‍රයිප්සින් අනුරූ අත්හදා බැලීමක් 25% කින් වැඩි වීමට හේතු විය.මේ අනුව, ට්‍රයිප්සින් සහ ලයිස්-එන් දත්ත කෙරෙහි පමණක් අවධානය යොමු කරන විට, අපි අනවශ්‍ය ෆොස්පෙප්ටයිඩ 4671 ක් හඳුනා ගත්තෙමු.අනාවරණය කරගත් අඩවි තවදුරටත් විශ්ලේෂණය කිරීමෙන් පෙන්නුම් කළේ Lys-N සහ trypsin දත්ත කට්ටල සැලකිය යුතු ලෙස වෙනස් ෆොස්ෆොරයිලීකරණ මෝස්තර වලින් පොහොසත් වී ඇති අතර, ෆොස්පෝප්‍රෝටියෝම් විශ්ලේෂණවලදී බහු ප්‍රොටේස් ප්‍රවේශයන් ඉතා වටිනා බව තවදුරටත් සනාථ කරයි.